从本质上讲,离心机是一种根据密度分离混合物的机器。它通过高速旋转样品来实现这一目的,产生强大的离心力,使密度较大的组分向外移动,远离旋转中心,而密度较小的组分则停留在靠近中心的位置。主要类型根据其最大转速和容量进行分类,这直接决定了它们的应用。
需要掌握的基本原则是,选择离心机并非关乎机器本身,而是关乎您需要分离的颗粒的大小和性质。颗粒越小,有效分离所需的转速和离心力就越大。
指导原则:相对离心力 (RCF)
不仅仅是转速 (RPM)
虽然离心机通常以每分钟转数 (RPM) 来描述,但真正重要的指标是相对离心力 (RCF),也称为 g 力。
RPM 仅测量转子旋转的速度。然而,RCF 测量的是样品内容物所承受的实际力。
这种力不仅取决于速度 (RPM),还取决于转子的半径。两台离心机以相同的 RPM 旋转,但转子大小不同,将产生非常不同的 RCF。因此,科学实验方案总是指定 RCF,而不是 RPM,以确保结果可重现。
离心机的实用分类
根据离心机能产生的 RCF 对其进行分组,可以更好地理解离心机,这与其主要应用直接相关。
低速离心机(通用型)
这些通常是用于常规分离的台式设备。它们以相对较低的速度运行,通常低于 10,000 RPM。
其目的是分离容易沉降的大而密的颗粒。可以将其视为用于收获或澄清的工具。
常见应用:
- 从培养物中沉淀完整细胞,例如酵母或细菌。
- 从血浆中分离红细胞和白细胞。
- 反应后收集大量化学沉淀物。
高速离心机(用于更精细的分离)
这些更强大的机器可以达到约 25,000 RPM 的速度,产生显著更高的 RCF。它们几乎总是冷藏型。
制冷至关重要,因为高速旋转产生的摩擦会产生大量热量,这可能会损坏或使敏感的生物样品(如蛋白质和酶)变性。
常见应用:
- 分离亚细胞组分,例如线粒体、叶绿体或细胞核。
- 大量收集微生物细胞。
- 分离较大的病毒颗粒。
超速离心机(大分子动力装置)
超速离心机代表了离心技术的巅峰,能够以超过 100,000 RPM 的速度旋转,并产生巨大的离心力(超过 500,000 x g)。
为了达到这些速度,转子腔室被密封并置于高真空下,以消除空气阻力和摩擦。它们也经过严格的冷藏。
两个主要子类型:
- 制备型超速离心机:用于分离和纯化非常小的颗粒。其目标是沉淀分子以进行进一步分析。应用包括纯化病毒、质粒、DNA、RNA 和单个蛋白质。
- 分析型超速离心机:这些是专门的研究仪器。其目的不是沉淀样品,而是实时研究它们。它们配备了光学检测系统,可以监测分子在旋转过程中如何沉降,从而使科学家能够确定分子量、形状和纯度等特性。
理解权衡:转子选择
离心机只是马达;转子容纳样品,是真正定义应用的关键部件。两种最常见的类型具有不同的用途。
固定角转子
在固定角转子中,样品管以恒定的陡峭角度(例如 25-45 度)放置。
这种设计对于沉淀非常高效。颗粒只需短距离移动即可撞击管壁并滑落形成致密的沉淀。然而,这可能会对样品造成高应力。
水平转子
在水平转子(或摆动头)中,试管放置在桶中,静止时垂直,但当转子旋转时会摆动到水平位置。
这非常适合在密度梯度中分离样品。力直接沿着试管的长度施加,允许形成清晰的层(如血液成分)而不会受到干扰,从而实现干净的分离。
为您的目标做出正确选择
要选择正确的仪器,您必须将所需的离心力与您希望分离的组分的大小相匹配。
- 如果您的主要重点是收获完整细胞或大量沉淀:简单、低速的台式离心机是合适且经济高效的工具。
- 如果您的主要重点是分离亚细胞器或微生物细胞:您将需要一台高速冷藏离心机来产生足够的离心力,同时保护您的样品免受热量影响。
- 如果您的主要重点是纯化病毒、蛋白质或核酸:超速离心机是唯一能够产生沉淀这些大分子所需极端离心力的工具。
- 如果您的主要重点是研究大分子的物理特性:您需要一台带有集成光学检测系统的专用分析型超速离心机。
最终,合适的离心机是能够提供必要离心力以有效分离目标组分与混合物其余部分的离心机。
总结表:
| 离心机类型 | 最大转速 / RCF | 主要应用 |
|---|---|---|
| 低速型 | < 10,000 RPM | 收获细胞(酵母、细菌)、分离血液成分、收集沉淀物 |
| 高速型 | 高达约 25,000 RPM | 分离细胞器(线粒体、细胞核)、分离大型病毒 |
| 超速离心机 | > 100,000 RPM (>500,000 x g) | 纯化病毒、质粒、蛋白质和核酸(制备型);分析分子特性(分析型) |
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