总而言之，正确纯化的 RNA 比其声誉所暗示的要稳定得多。如果未受酶污染，提取的 RNA 可以在室温下储存长达两天，在 4°C 下储存两周，并且在 -20°C 或 -80°C 下储存时，可以承受多达十次冻融循环而不会发生可测量的降解。
RNA 储存的核心原则不在于 RNA 分子本身的固有脆弱性，而在于有效灭活 RNase 酶。温度只是我们用来控制这些破坏性酶活性的工具。
RNA 完整性的真正威胁：RNase
RNA 特别脆弱的普遍看法是一个实际真理，其根源在于一个原因：核糖核酸酶 (RNase)。了解如何控制它们是保存样品的关键。
什么是 RNase？
RNase 是专门分解 RNA 的酶。它们以稳定性强著称，不需要辅助因子，并且几乎存在于所有表面，包括我们的手、灰尘颗粒和未经认证的实验室设备。
纯化 RNA 样品中即使是微量的 RNase 也是导致降解的主要原因。
温度如何控制 RNase 活性
在低温下储存 RNA 并不能破坏 RNase；它只是减缓或使其休眠。
- 在室温下，活跃的 RNase 会迅速降解 RNA。
- 在 4°C 下，酶活性显著降低，但并未停止。
- 在 -20°C 和 -80°C 下，酶活性被有效冻结，只要保持冷冻状态，就能无限期地保存 RNA。
这就是为什么稳定性时间表与温度直接相关——它们衡量的是任何潜在的、污染的 RNase 造成显著损害所需的时间。
RNA 储存实用指南
RNA 的稳定性完全取决于您为预期时间线使用正确的温度，前提是您在提取过程中遵循了无核酸酶处理程序。
长期存档 (-80°C)
对于储存超过几个月或极其珍贵的样品，-80°C 是金标准。在此温度下，所有酶促和几乎所有化学过程都停止，确保样品完整性多年。
中期储存 (-20°C)
对于日常工作和长达数月的储存，-20°C 完全足够。在此时间范围内，其稳定性与 -80°C 相当，使其成为大多数工作实验室的实用选择。
短期实验使用 (4°C)
您可以放心地将 RNA 放在冰上或 4°C 冰箱中长达 14 天而不会降解。这非常适合您在一两周内积极使用样品进行一系列实验时。务必使用密封管以防止蒸发。
即时台面操作 (室温)
纯化的 RNA 足够稳定，可以在干净的实验台上室温放置长达两天。这提供了一个安全的窗口，可以进行逆转录或设置 qPCR 板等下游应用，而无需持续将样品保存在冰上。
理解权衡和最佳实践
仅仅选择一个温度是不够的。正确的处理策略对于保持提取方案所建立的质量至关重要。
冻融循环的危险
冷冻 RNA 最显著的风险不是储存本身，而是解冻和再冷冻的过程。提及的10 次冻融循环是一个关键限制。
每个循环都会提供一个短暂的窗口，让休眠的 RNase 变得活跃。虽然一两次循环不太可能引起问题，但重复的循环将不可避免地导致样品降解。
分装的关键重要性
保护 RNA 的最佳实践是在提取后立即分装样品。
将主样品储存在多个小的一次性管中，可以避免每次实验都解冻整个库存。这完全避免了冻融循环造成的损害，并保持了主样品的完整性。
水与缓冲液储存
虽然无核酸酶水很常见，但将 RNA 储存在像 TE（Tris-EDTA）这样的弱缓冲液中可以提供额外的保护。缓冲液中的 EDTA 螯合某些 RNase 活性所需的二价阳离子，为防止残留污染增加了另一层保障。
为您的目标做出正确选择
您的储存策略应由您的实验计划和样品的价值决定。
- 如果您的主要重点是长期存档或创建无价的参考样品：将您的 RNA 储存在缓冲溶液中，分装到 -80°C 的一次性管中。
- 如果您的主要重点是数周或数月内的常规分析：将等分试样储存在 -20°C 下，可以在安全性和可及性之间取得实用平衡。
- 如果您的主要重点是在几天内立即处理：将样品储存在 4°C 甚至室温下是安全的，前提是您的初始提取产生了纯净、无核酸酶的产品。
最终，您的处理技术和严格的无核酸酶工作流程对于保存您的 RNA 而言，远比您冰箱的具体温度更为关键。
总结表：
| 温度 | 建议最大储存时间 | 主要考虑因素 |
|---|---|---|
| 室温 | 长达 2 天 | 适用于即时台面操作 |
| 4°C | 长达 2 周 | 短期实验使用的理想选择 |
| -20°C | 数月 | 适用于日常工作和中期储存 |
| -80°C | 数年（长期存档） | 珍贵样品的金标准 |
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