本质上,离心机根据物理性质分离溶液中的组分。 它利用巨大的旋转力来加速自然沉降过程,迫使密度更大、体积更大或更重的颗粒聚集在容器底部,而较轻的组分则悬浮在上层液体中。
离心机是一种极大地加速重力作用的仪器。它以高速旋转样品以产生强大的离心力,该力根据颗粒的密度、大小和形状对溶液中的混合颗粒进行分类。
核心原理:离心如何工作
要了解离心机的作用,我们必须首先了解它产生的力。这个过程是我们每天都会看到的自然现象的增强版。
从重力到离心力
想象一下将一罐浑浊的水静置不动。随着时间的推移,较重的沙子和淤泥会因重力而沉到底部,顶部留下较清澈的水。离心机做的是同样的事情,但速度快了数千倍。
通过高速旋转样品,它会产生一种强大的向外力,称为相对离心力 (RCF)。这种力比地球重力强得多,作用于溶液中的每个颗粒。
决定因素:密度和大小
并非所有颗粒对这种力的反应都相同。密度更大、体积更大的颗粒受 RCF 的影响更大,并更快地向外(朝向试管底部)移动。
这种运动差异,即沉降速率,是分离的关键。像完整细胞这样较重的组分会比蛋白质或病毒这样较小的组分分离得更快,所需速度也更低。
产生的分离结果:上清液和沉淀物
离心后,溶液在物理上分为两个不同的部分。
聚集在试管底部的固体、压实的物质称为沉淀物 (pellet)。
顶部剩余的澄清液体称为上清液 (supernatant)。然后可以通过小心地倒出(倾析)上清液来轻松分离这两个组分。
什么决定了分离结果?
实现所需的分离不仅仅是打开机器。结果是通过您必须理解并正确设置的几个关键参数来精确控制的。
转速的作用(RPM 与 RCF)
速度是最关键的因素。它通常以每分钟转数 (RPM) 表示,它简单地描述了电机旋转转子的速度有多快。
然而,更科学准确的度量是相对离心力 (RCF),通常以“重力倍数”(x g) 来衡量。RCF 考虑了转子的半径,为您提供了施加在样品上的真实分离力。两台以相同 RPM 运行的不同离心机可能会产生非常不同的 RCF。
时间的重要性
离心运行的持续时间也至关重要。更长的旋转时间可以让较小或密度较低的颗粒有更多时间沉降并形成紧密的沉淀物。
分离酵母细胞等大颗粒可能只需要几分钟,而分离微小的细胞外囊泡可能需要在更高力下进行数小时的旋转。
溶液本身的影响
液体或溶剂的特性也起着作用。高粘度的溶液,如含有甘油的溶液,会减慢颗粒的运动。
温度也可能是一个因素,因为它会影响溶液的粘度和生物样品的稳定性。这就是许多高速离心机需要制冷的原因。
常见应用和分离类型
沉淀的基本原理很简单,但离心可用于更复杂的分离,使其成为现代生物学和化学的基石。
差速离心
这是最常见的技术。混合物会经历逐渐加快的离心速度,以根据不同的沉降速率分离组分。
低速旋转可能首先使完整细胞沉淀。然后移除上清液,并以高得多的速度旋转,以使线粒体或其他细胞器等较小组分沉淀。
密度梯度离心
这种先进的方法用于纯化。样品被分层放置在具有密度梯度(例如蔗糖或氯化铯梯度)的溶液之上。
在离心过程中,颗粒穿过梯度,并在达到与其自身密度相等的点时停止。这使得对大小非常相似但密度不同的颗粒进行极其精确的分离成为可能。
日常示例
在实验室之外的许多环境中都会遇到离心。它用于从血库中的血液中分离红细胞和血浆,在乳制品行业中分离牛奶中的奶油,以及在废水处理中分离固体和液体。
根据您的目标做出正确的选择
您选择的参数完全取决于您想用溶液实现的目标。
- 如果您的主要重点是分离大而致密的颗粒(如细胞): 通常短时间(5-10 分钟)以低 RCF(例如 500 x g)旋转就足够了。
- 如果您的主要重点是收集较小的组分(如细胞器或细菌): 您需要更长的时间(15-30 分钟)以中等 RCF(例如 10,000-20,000 x g)旋转。
- 如果您的主要重点是分离非常小的颗粒(如病毒或蛋白质): 这需要一台能够产生极高 RCF(>100,000 x g)的超速离心机,运行时间为一小时到数小时。
- 如果您的主要重点是高精度地纯化特定分子: 密度梯度离心是最合适和最强大的技术。
通过施加远大于重力的力,离心机将均匀的溶液转化为不同的、可分离的层,使其成为分析和纯化不可或缺的工具。
摘要表:
| 分离目标 | 典型 RCF (x g) | 典型时间 | 关键结果 |
|---|---|---|---|
| 大颗粒(例如细胞) | 500 x g | 5-10 分钟 | 致密物质的沉淀物 |
| 较小组分(例如细菌) | 10,000-20,000 x g | 15-30 分钟 | 分离的细胞器或微生物 |
| 细小颗粒(例如病毒) | >100,000 x g | 1+ 小时 | 高纯度分离 |
| 精确纯化 | 变化(梯度) | 变化 | 基于密度的分离 |
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