实验室高压灭菌器是长周期发酵的关键基础,它建立了绝对无菌的基准。通过使用 121 °C 的高压蒸汽,高压灭菌器在过程开始前彻底灭菌整个膜生物反应器系统——包括陶瓷膜、容器和连接管道。这个严格的初始步骤是防止长时间实验中污染失败的主要防御措施。
核心要点 在持续数月的连续过程中,即使是微小的生物污染物也能繁殖并取代目标菌株。高压灭菌器通过确保系统从完全纯净的状态开始,消除了这种“放大效应”,从而保证了稳定、纯菌株的发酵。
全系统灭菌的原理
高温蒸汽渗透
高压灭菌器通过将设备暴露在 121 °C 的高压蒸汽下运行。该温度足以使蛋白质变性并杀死标准清洁可能遗漏的微生物。
全面覆盖
无菌性不能仅限于主容器。高压灭菌器处理整个组件,包括用于过滤的陶瓷膜、反应器容器和复杂的管道网络。
消除死角
流体管道和阀门连接通常会藏匿细菌。高压蒸汽会强制进入这些难以到达的区域,确保基础设施的任何部分都不会将污染物引入无菌培养基。
为什么长周期过程容易受到影响
放大风险
与短周期批次运行相比,运行数月的发酵过程面临着独特的风险。在 24 小时运行中可能微不足道的轻微污染事件,在数周内可能变得灾难性。
保护纯菌株
随着时间的推移,竞争微生物可能会过度生长并取代预期的生产菌株。高压灭菌器确保了维持纯培养物所需的初始无菌性,防止因生物漂移而导致数月工作的成本损失。
理解操作权衡
材料兼容性
虽然高压灭菌有效,但它需要坚固的材料。参考资料特别强调了陶瓷膜,它们之所以受到青睐,是因为它们能够承受 121 °C 蒸汽的热冲击和压力而不会降解。
系统尺寸限制
高压灭菌“整个系统”意味着生物反应器装置必须足够紧凑,能够放入高压灭菌器腔室。这限制了使用此特定方法进行灭菌的反应器容器的规模。
确保过程完整性
为了最大限度地提高连续发酵项目的成功率:
- 如果您的主要重点是过程稳定性:优先进行严格的运行前高压灭菌,以消除长期污染放大风险。
- 如果您的主要重点是设备选择:确保所有接触液体的部件,特别是过滤膜,都具有耐受高压蒸汽的额定值(例如,陶瓷而非敏感聚合物)。
零小时的总无菌性是保证三个月过程有效性的唯一方法。
总结表:
| 特征 | 在长周期发酵中的优势 |
|---|---|
| 灭菌方法 | 121°C 高压蒸汽,用于完全蛋白质变性 |
| 覆盖区域 | 容器、陶瓷膜和连接管道 |
| 污染控制 | 消除数月运行中的微生物放大风险 |
| 材料韧性 | 支持陶瓷膜和反应器等坚固组件 |
| 过程完整性 | 确保从零小时到项目完成的纯菌株稳定性 |
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