当高压灭菌器不可用或不适用时，您仍然可以使用几种经过验证的方法实现实验室级别的灭菌。最常见的替代方案包括在烘箱中进行干热灭菌、使用气体或液体进行化学灭菌、辐射灭菌以及对液体进行无菌过滤。方法的选择完全取决于您需要灭菌的材料，因为某些物品（如热敏塑料）无法承受高压灭菌器的高压蒸汽。
灭菌的核心原则并非与单一机器绑定，而是成功消除所有微生物生命。高压灭菌器的最佳替代方案是能够在不损坏您的设备或样品的情况下实现此目标的方法，这需要仔细匹配材料和方法。
为什么要选择高压灭菌的替代方案？
虽然高压灭菌（蒸汽灭菌）是许多应用的黄金标准，但它并非万能解决方案。了解其局限性是选择合适替代方案的关键。
材料不兼容性
高温（通常为121°C或更高）和加压蒸汽的组合可能会损坏某些材料。这包括可能熔化的热敏塑料、敏感电子设备以及反复暴露于蒸汽可能会变钝的锋利金属器械。
物流或设备限制
在某些情况下，高压灭菌器可能根本不可用，因维护而停止服务，或者对于您需要处理的设备来说太小。可靠的替代方案对于不间断地继续工作至关重要。
无高压灭菌器的主要灭菌方法
每种方法都基于不同的原理，适用于特定类型的设备和材料。
干热灭菌
此方法使用实验室烘箱通过长时间高温杀死微生物。它通过氧化使蛋白质变性，这需要比蒸汽加热更高的温度和更长的暴露时间。
它非常适用于玻璃器皿（如烧瓶和烧杯）、金属器械、粉末和油。典型的循环是 170°C (340°F) 持续 60 分钟 或 160°C (320°F) 持续 120 分钟。
化学灭菌（冷灭菌）
此方法使用活性化学物质，通常以气态形式，对无法承受高温的物品进行灭菌。它是单次使用医疗器械和敏感实验室设备的常见选择。
主要例子包括 环氧乙烷 (EtO) 气体，它非常有效但有毒且需要长时间通风；以及 过氧化氢等离子体，它更快更安全但有材料兼容性限制。像 戊二醛 这样的液体灭菌剂也用于浸泡器械。
无菌过滤
过滤不会杀死微生物；它只是物理去除它们。此方法专门用于液体，例如培养基、蛋白质溶液或维生素补充剂，这些物质会被热破坏。
液体通过孔径足够小以捕获细菌的滤膜，通常为 0.22 微米 (µm)。这使得滤液无菌，但请注意，非常小的病毒或朊病毒可能仍然会通过。
辐射灭菌
辐射会损害微生物的DNA，阻止它们复制。这是一种高效的工业规模方法，用于预先灭菌许多一次性实验室产品。
伽马射线 是最常见的形式，用于塑料培养皿、离心管和移液管吸头等物品。紫外线 (UV) 辐射 是一种穿透力较弱的形式，用于生物安全柜内部的表面消毒，但对于灭菌整个物体效果不佳。
了解权衡和风险
没有一种方法是完美无缺的。选择高压灭菌的替代方案需要清楚地了解潜在的风险和局限性。
材料损坏风险
干热可能会熔化塑料并使其他材料变形，而这些材料在高压灭菌器中可能稳定。相反，环氧乙烷等化学灭菌剂可能会被某些塑料吸收，需要长时间通风，而过氧化氢可能会腐蚀某些金属。
化学和安全危害
化学灭菌剂通常有毒、致癌或具有高反应性。使用环氧乙烷等方法需要专门的通风室和严格的安全协议，以保护人员免受暴露。
灭菌不完全
如果操作不当，替代方法可能会失败。干热需要精确的时间和温度控制，因为空气传热效率低于蒸汽。紫外线辐射仅对具有直接视线暴露的表面有效；任何“阴影”区域都不会被消毒。
验证的必要性
就像高压灭菌器一样，您必须验证所选方法是否成功。这涉及使用 生物指示剂（高抗性细菌的孢子）或 化学指示剂，它们会变色以确认已达到灭菌条件。
为您的目标选择正确的方法
根据您处理的材料和可用的资源选择您的灭菌过程。
- 如果您正在灭菌玻璃器皿或不生锈的金属器械： 使用干热烘箱，因为它对耐热、非水性物品有效且直接。
- 如果您正在灭菌热敏塑料或复杂电子设备： 化学灭菌是最合适的方法，尽管它需要专门的设备和严格的安全协议。
- 如果您正在灭菌含有热敏成分（例如维生素、抗生素）的液体： 使用 0.22 µm 滤器进行无菌过滤，以去除细菌而不破坏敏感化合物。
- 如果您正在对工作台面或密闭空间中的空气进行消毒： 使用紫外线辐射，但要了解其对灭菌固体、三维物体的局限性。
通过仔细匹配灭菌方法与材料，您可以确保设备和实验结果的完整性。
总结表：
| 方法 | 最适合 | 主要考虑事项 |
|---|---|---|
| 干热烘箱 | 玻璃器皿、金属器械、粉末、油 | 需要 160-170°C 持续 1-2 小时；避免热敏塑料 |
| 化学灭菌 | 热敏塑料、电子设备、一次性器械 | 使用 EtO 气体或 H2O2 等离子体；需要安全协议和通风 |
| 无菌过滤 | 热敏液体（培养基、蛋白质、维生素） | 使用 0.22 µm 滤器；去除细菌但不能去除所有病毒 |
| 辐射灭菌 | 预灭菌一次性用品（培养皿、移液管吸头） | 工业规模（伽马）或表面消毒（紫外线） |
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