在组织培养实验室中,高压灭菌器的作用是使过程中使用的所有培养基、玻璃器皿和仪器达到绝对无菌。它利用高压蒸汽达到足以杀死所有形式微生物生命(包括细菌、病毒和高抗性孢子)的温度,否则这些微生物会污染并破坏娇嫩的细胞培养物。
任何组织培养实验的成功都取决于维持一个完全无菌或无菌的环境。高压灭菌器不仅仅是一种清洁设备;它是通过可靠地消除所有潜在污染物,使这种无菌环境成为可能的主要工具。
组织培养中对无菌的迫切需求
组织培养的基本目标是在活体生物体外培养细胞。这需要一个营养丰富的环境,但不幸的是,这也是不受欢迎的微生物的完美滋生地。
污染物的乐园
您准备的培养基富含糖、氨基酸和维生素。虽然这对您的细胞至关重要,但它也是细菌和真菌的理想盛宴,它们的生长速度远快于动物或植物细胞。
污染的后果
单个细菌或真菌孢子可以迅速占据培养皿。这种污染会与您的目标细胞争夺营养,改变培养基的 pH 值,并释放有毒副产物,导致您的实验彻底失败。
高压灭菌原理:超越简单的煮沸
高压灭菌器通过高温、高压和蒸汽的组合实现灭菌,这种方法比简单的煮沸更有效。
加压蒸汽:高温的关键
在正常大气压下,水在 100°C (212°F) 沸腾。高压灭菌器是一个密封腔室,可增加压力,使内部蒸汽达到更高的温度——通常为 121°C (250°F)。
热量和时间:致命组合
这种过热蒸汽有效地渗透并将热量传递给腔室内的所有物品。标准灭菌周期在 121°C 和 15 psi(磅/平方英寸)的压力下运行至少 15-20 分钟,确保有足够的时间杀死即使是最耐热的孢子。
蛋白质变性:杀灭机制
蒸汽的强烈热量和水分不可逆地使微生物体内必需的蛋白质和酶变性并凝固。这个过程是致命且绝对的,确保没有微生物能够存活或繁殖。
常见陷阱和最佳实践
虽然高压灭菌器非常有效,但其成功取决于正确使用。失误可能导致灭菌不完全并损害您的工作。
热敏材料不能高压灭菌
许多塑料会在 121°C 下熔化。此外,培养基的某些关键成分,如某些抗生素或生长因子,是热不稳定的(会被热破坏),必须进行过滤灭菌,而不是高压灭菌。
正确装载对于蒸汽渗透至关重要
物品必须松散包装,以便蒸汽能够自由地在每个物体周围和内部循环。瓶盖拧得过紧会阻止蒸汽进入,甚至可能导致瓶子在压力变化下破裂。瓶盖应始终保持略微松动。
例行验证确保性能
切勿假设循环成功。每次运行时都要使用高压灭菌指示胶带,它会变色以确认达到目标温度。对于关键应用,定期使用含有耐热孢子的生物指示剂可确认高压灭菌器的杀灭能力。
为您的目标做出正确选择
高压灭菌器是基础工具,正确使用它与您的实验结果和实验室安全直接相关。
- 如果您的主要重点是成功的细胞生长:始终对您的培养基(不含热不稳定成分)、水、玻璃器皿和金属仪器进行高压灭菌,以创造您的细胞茁壮成长所需的无菌环境。
- 如果您的主要重点是实验室安全和控制:使用高压灭菌器对所有生物危害废物进行去污,包括用过的培养皿和受污染的实验室设备,然后进行处置。
- 如果您的主要重点是效率:计划您的工作以运行完整、正确装载的高压灭菌循环,而不是许多小型、低效的循环,并事先将热稳定物品与热敏感物品分开。
最终,掌握高压灭菌原理是实现组织培养中一致可靠结果的不可协商的一步。
总结表:
| 功能 | 关键细节 |
|---|---|
| 主要目标 | 实现绝对无菌,以防止娇嫩细胞培养物受到污染。 |
| 灭菌方法 | 在 121°C (250°F) 和 15 psi 下,高压蒸汽处理 15-20 分钟。 |
| 机制 | 使微生物蛋白质变性并凝固,杀死所有细菌、病毒和孢子。 |
| 常用灭菌物品 | 培养基(不含热不稳定成分)、玻璃器皿、金属仪器、水。 |
| 关键最佳实践 | 松散装载以利于蒸汽渗透,使用指示胶带,避免热敏感材料。 |
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